EML4-ALK V1 [L1196M/L1198F]/BaF3

      棘皮微管相关蛋白（Echinoderm microtubule-associated protein，EMAP）在海胆中表达， 是第一个被鉴定的 EMAP 样蛋白(EML)家族成员。它是海胆卵微管（MT）制剂的主要成分， 也被发现在间期和有丝分裂时与微管蛋白共定位。

      ALK 是胰岛素受体超家族的一员，首次在间变性大细胞淋巴瘤中通过与核磷蛋白 （NPM）融合发现。癌细胞中的 ALK 信号传导通过三种主要机制发生：基因融合、基因 扩增和点突变。

      在肺癌中检测到的第一个致癌融合是 EML4-ALK，由 2 号染色体短臂上的一个小倒位 产生，促进 EML4 N 末端与 ALK（外显子 20）的融合。一旦 EML4 中的断点出现在不同 的外显子（2、6、13、14、15、18 和 20）中，EML4-ALK 融合蛋白就会呈现多种变体。 其中 EML4-ALK 融合中最常见的变体亚型为 V1 和 V3a/b，约占所有 EML4-ALK 融合突变 的 70%。不同 EML4-ALK 变体的表达可能会影响对 ALK TKI 的反应，从而影响继发性耐 药特异性 ALK 突变的发展倾向。EML4 与 ALK 激酶结构域的融合导致异常信号传导，从 而增加细胞生长、增殖和细胞存活。在 NSCLC 患者的 ALK 中检测到的点突变约占观察到 的耐药机制的三分之一，其中最常见的是 p.L1196M（类似于 EGFR 的 p.T790M）。其他确 定的突变有 p.1151Tins、p.L1152R、p.C1156Y、p.I1171T、p.F1174L、p.V1180L、p.G1202R、 p.D1203N、p.S1206Y 和 p.G1269A 。这些突变增加了酪氨酸激酶受体与 ATP 的亲和力，降 低了 TKI 的结合亲和力。ALK 基因突变，例如 p.1151Tins 和 p.G1202R，导致对第二代 ALK TKI 产生耐药性；p.L1196M 和 p.L1152R 赋予对第二代和第三代 ALK TKI 的敏感性； p.G1202R 导致对第一代和第二代 ALK TKI 产生耐药性。

      BaF3（小鼠原 B 细胞）的生长和增殖需要 IL-3 的维持。通过引入各种表达激酶的基因， 能作为 BaF3 的驱动基因，让 BaF3 不再依赖 IL-3 而增殖，进而激酶基因成为 BaF3 增殖依 赖的驱动基因，用于评估小分子药物对激酶的靶向抑制作用，原理及流程见下图所示。
 

Figure 1. EML4-ALK V1 [L1196M/L1198F] BaF3 细胞的构建原理图

1. Sanger of EML4-ALK V1 [L1196M/L1198F]/BaF3

Figure 2. EML4-ALK V1 [L1196M/L1198F]/BaF3 Fusion

Figure 3. EML4-ALK V1 [L1196M/L1198F]/BaF3 L1196M+L1198F

2. Anti-proliferation assay

Figure 4. CTG Proliferation Assay of EML4-ALK V1 [L1196M/L1198F] BaF3(C1).