慢病毒整合位点标准品强势来袭

发布时间:2024/11/11分类:技术文章来源:304am永利集团

嵌合抗原受体T细胞（Chimeric antigen receptor Tcell, CAR-T）免疫疗法是将应用基因修饰技术制备表达，嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor, CAR)的T淋巴细胞，经体外扩增后再回输至患者体内的一种个体化治疗方法。

近年来，随着Kymriah, Yescarta 以及 Strimvelis等细胞治疗产品陆续推上市场，慢病毒作为细胞装载CAR过程的关键中间载体，确保慢病毒为基础的药物质量和安全性挑战巨大。去年年底FDA公布调查CAR-T疗法的安全性问题—T细胞癌症风险的出现被认为源于其使用的基因递送载体-慢病毒载体后，于今年1月31日正式发布“ Considerations for the development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products”指导原则。当中建议根据风险评估来确定载体拷贝数（VCN）的放行标准。风险评估包括插入位点分析、克隆优势、剂量、适应症、研究人群等研究支持的实验数据。国家药品监督管理局药品审批中心（CDE）发布的《基因修饰细胞治疗产品非临床研究与技术指导原则》也将“插入突变风险评估”作为非临床安全性研究的内容，并详细规定关键风险因素的评估要点，因此CAR-T治疗需要评估潜在的插入突变风险和致癌性风险。

慢病毒整合位点检测方法

目前检测慢病毒整合位点的主要平台为高深度测序（NGS)。

Table 1. 常见慢病毒整合位点检测方法比较

综合考虑，304am永利集团选择多种方法（捕获探针法测序+ sanger + ddPCR）验证，充分验证标准品的准确性。在验证过程中，捕获探针法测序技术针对慢病毒整合位点检测的准确性得到了很好的验证。

慢病毒整合位点标准品

我国在2021年连续出台了4部基因治疗相关产品的指导原则都指出慢病毒整合检测至少要包含1. 整合方向 2. 整合位置 3. 特定整合位置和整合方向的绝对克隆数目。

针对这一要求，304am永利集团现推出慢病毒整合位点标准品。

部分产品数据展示：

Fig 1. Results of CBPL0002 by NGS (Probe capture method).

通过NGS（捕获探针法测序）技术，结合生信分析方法，选取1000×以上Reads数的基因进行Sanger以及ddPCR法验证，同时采用ddPCR方法检测整合频率。多种方法相结合，准确定位慢病毒插入位点以及整合频率。

Fig 2.Results of CBPL0002 by Sanger sequencing.

Fig 3.Results of CBPL0002 by ddPCR.

根据NGS（捕获探针法测序）结果确定慢病毒插入位点，通过Sanger测序以及ddPCR法再次验证，准确定位慢病毒插入位点以及整合频率。

CAR-T细胞疗法被认为是最有前途的癌症治疗方法之一，其在血液系统瘤中的运用已取得了优异的疗效，可靠的检测方法可以准确有效分析慢病毒插入位点，协助客户评估插入突变的可能性以及相关的风险，提高细胞免疫治疗的安全性。

慢病毒整合位点检测服务

304am永利集团现推出针对慢病毒整合位点检测服务（捕获探针法测序技术）。捕获探针法测序技术主要是针对LTR区域做探针捕获，PCR后，NGS测序验证，结合生信分析方法，判断慢病毒插入位点。后续同时采用了sanger以及ddPCR方法对NGS(捕获探针法测序)技术进行了验证，NGS(捕获探针法测序)检测出的位点，sanger以及ddPCR方法均检出。